Flashcards: Introduction au clonage moléculaire — 24 cards

ADN recombinant — définition ?

Molécule d’ADN construite en laboratoire à partir de sources multiples.

Vecteurs plasmidiques — rôle ?

Support pour insérer et cloner des fragments d’ADN.

Banque génomique — objectif ?

Représenter tout le génome d’un organisme dans une collection de vecteurs.

ADNc — synthèse ?

ADN complémentaire synthétisé à partir de l’ARNm.

Insertion ADNc — méthode ?

Dans un vecteur plasmidique pour créer un clone recombinant.

Organisation du génome humain — caractéristique ?

Organisation répétée et présence de pseudogènes.

Vecteurs pour grands inserts — exemple ?

BAC, capables de cloner jusqu’à 2000 kb.

PCR — principe ?

Amplification exponentielle d’une séquence spécifique d’ADN.

Amorces PCR — conception ?

18-25 nt, GC 45-55%, Tm proche.

Milieu PCR — composition ?

dNTP, amorces, ADN polymérase thermostable, tampon, ADN matrice.

Applications PCR — autres ?

RT-PCR, qPCR, PCR multiplex, amplification isotherme.

Protéines recombinantes — production ?

Exprimer un gène dans un hôte pour isoler la protéine.

Clonage moléculaire — but ?

Conserver et amplifier une séquence d’ADN d’intérêt.

Banque d’ADNc — construction ?

Insérer des ADNc dans vecteur pour représenter l’expression génique.

Techniques de criblage — exemple ?

Hybridation moléculaire avec sonde marquée.

PCR — étape clé ?

Cycles de dénaturation, hybridation, extension.

Amorces — spécificité ?

Se lient à la séquence cible avec Tm optimisée.

PCR — utilisations ?

Séquençage, clonage, quantification, étude d’expression.

Vérification clone — méthode ?

Digestion par restriction, électrophorèse, séquençage.

Insertion ADN dans vecteur — étape ?

Ligation entre insert et vecteur digérés.

Construction banque génomique — taille ?

Définie par la taille du génome et des inserts.

Amorces pour séquences inconnues — stratégie ?

Utiliser des amorces dégénérées ou RACE PCR.

PCR — erreur fréquente ?

Mauvaise conception amorces ou Tm non adapté.

Protéines recombinantes — purification ?

Chromatographie, affinity, filtration.