Flashcards: Techniques de purification et analyse enzymatique — 24 cards

Organisation des TP biochimie ?

Séances au bâtiment Henri Moissan, début à 9h, présence obligatoire.

Absence non justifiée — conséquence ?

Interdiction de passer l’épreuve écrite.

Contrôle continu — composition ?

1/3 TP et compte rendu, 2/3 examen écrit.

Rôle des enseignants ?

Encadrent, corrigent, évaluent et valident les travaux.

Extraction protéines Arabidopsis — étape clé ?

Broyage, filtration, centrifugation dans tampon stabilisant.

Tampon phosphate pH 7,5 — rôle ?

Stabiliser les protéines lors de l’extraction.

Cocktail d’inhibiteurs — but ?

Prévenir la dégradation protéique.

PVPP — utilisation ?

Éliminer polyphénols interférents.

Filtration et centrifugation — objectif ?

Clarifier l’extrait, éliminer débris et PVPP.

Chromatographie échangeuse — principe ?

Séparation par charge négative, échange d’ions Na+.

Chargement sur la résine — étape ?

Déposer l’extrait pour retenir protéines chargées négativement.

Élution par NaCl — principe ?

Dissociation des protéines de la résine par force ionique croissante.

Absorbance à 280 nm — utilité ?

Tracer le profil d’élution des protéines.

Spectrophotométrie ICDH — principe ?

Suivi formation NADPH à 340 nm.

Réaction ICDH — produit ?

NADPH à partir de NADP+ et isocitrate.

Méthode Bradford — principe ?

Liaison du bleu de Coomassie aux protéines, changement de couleur.

Changement de couleur Bradford ?

Rouge à bleu, mesurable à 595 nm.

SDS-PAGE — principe ?

Séparation protéines selon masse moléculaire sous dénaturation.

Dénaturation SDS — rôle ?

Uniformiser charge, détruire structure native.

Electrophorèse native — principe ?

Séparer selon charge, conformation, masse sans dénaturant.

Isoformes en native — avantage ?

Identifier différentes formes ou conformations.

Cinétique ICDH — paramètre ?

Vitesse initiale (v₀), liée à formation NADPH.

Michaelis-Menten — relation ?

v₀ = Vmax×[S]/(Km + [S]) pour paramètres cinétiques.

Activité spécifique — définition ?

Activité enzymatique par mg de protéines.