Techniques de Séquençage et PCR

📋 Plan du Cours

1. Préparation de l'ADN
2. Séquençage ADN
3. Applications du séquençage
4. Analyse du SRAS-CoV-2
5. Technique PCR
6. Principe de la PCR
7. Conception des amorces
8. Analyse par électrophorèse
9. PCR quantitative

📖 1. Préparation de l'ADN

🔑 Notions clés & Définitions

• Lyse cellulaire : étape consistant à rompre la membrane ou la paroi cellulaire pour libérer le contenu cellulaire, notamment l'ADN. Elle peut être réalisée par méthodes chimiques (lyse alcaline, tensio-actifs), enzymatiques (lyzozyme), ou physiques (choc thermique, sonication, broyage avec microbilles, éclatement).
• Purification de l'ADN : opération visant à isoler l'ADN des autres composants cellulaires ou moléculaires présents dans l'extrait. Elle peut se faire par précipitation à l’éthanol ou par passage sur colonnes d’affinité.
• Précipitation de l'ADN : méthode consistant à ajouter de l’éthanol ou d’isopropanol pour faire coaguler et récupérer l’ADN par centrifugation.
• Colonnes d’affinité : dispositifs contenant des matrices spécifiques permettant de capturer l’ADN ou d’autres biomolécules par interactions spécifiques, suivies d’une étape d’élution pour récupérer l’ADN purifié.
• Kits d'extraction d'ADN : ensembles de réactifs et de colonnes commercialisés permettant d’extraire rapidement et efficacement l’ADN de différents types cellulaires (bactéries, végétaux, animaux, virus) ou d’échantillons complexes (sol, eau, aliments, fécès).