Hoja de repaso: Techniques de contraste microscopique

📋 Plan du Cours

1. Contrastes de phase et interférentiel
2. Microscopie en fond noir
3. Compléments optiques

📖 1. Contrastes de phase et interférentiel

★ À maîtriser

📌 Le contraste de phase rend visibles des cellules vivantes sans préparation ni coloration en ne laissant passer que la lumière réfractée, tandis que le contraste interférentiel utilise l’interférence en lumière polarisée et la recomposition de la lumière.

• Le contraste interférentiel permet d’observer des cellules vivantes et donne une fausse impression de relief.

Compléments

• Le contraste de phase donne une image quasi invisible et mate, et un halo blanc peut entraîner une perte de résolution.

• En contraste de phase, les anneaux clairs appartiennent au condenseur et les anneaux sombres à l’objectif, ce qui permet de sélectionner la lumière réfractée.

💡 Astuce mémo

Phase : lumière réfractée ; interférentiel : lumière recomposée

📖 2. Microscopie en fond noir

📝 Points essentiels

• Le fond noir permet d’observer des bactéries brillantes sans coloration, mais son intensité lumineuse est faible.

• Le fond noir améliore le contraste grâce à un condenseur opaque central qui bloque la lumière directe et ne laisse voir que la lumière diffusée par l’échantillon.

📖 3. Compléments optiques

🔑 Notions clés & Définitions

• Épifluorescence : Permet d’observer un petit objet fluorescent ou des fluorochromes qui absorbent la lumière grâce à des filtres d’excitation et d’émission.

★ À maîtriser

📌 L’autofluorescence, ou fluorescence primaire, est produite par l’objet lui-même, tandis que la fluorescence secondaire résulte de l’ajout de fluorochromes.

📌 En polarisation, la lumière est transmise lorsque les deux plans polarisants coïncident et elle est totalement éteinte lorsque ces plans forment un angle de 90 degrés.

• En polarisation, l’échantillon est placé entre un polariseur et un analyseur, qui sont des lames polarisantes.

Compléments

• Les structures polarisantes sont biréfringentes, comme certains cristaux, notamment les cristaux d’acide urique et de pyrophosphate.

• La lumière émise par un objet fluorescent peut apparaître rouge, verte ou bleue.

• Le DAPI permet d’observer les chromosomes et les spermatozoïdes en fluorescence bleue.

📊 Tableaux de synthèse

Comparaison des contrastes microscopiques

Méthode	Principe	Coloration et observation
Contraste de phase	Sélection de la lumière réfractée	Sans préparation ni coloration ; cellules vivantes
Contraste interférentiel	Interférence en lumière polarisée et recomposition de la lumière	Cellules vivantes ; fausse impression de relief
Fond noir	Condenseur opaque central bloquant la lumière directe	Sans coloration ; bactéries brillantes ; faible intensité lumineuse