Flashcards: Introduction à la PCR et ses Applications — 14 cards

Histoire de la PCR — année ?

Inventée en 1986 par Kary Mullis.

Principe de la PCR — mécanisme ?

Amplification exponentielle d’un fragment d’ADN via cycles répétés.

Composants de la PCR — principaux ?

dNTPs, Taq polymérase, amorces, MgCl2, tampon.

Cycle de PCR — étapes ?

Dénaturation, hybridation, élongation.

PCR en temps réel — objectif ?

Quantifier l’ADN en suivant la fluorescence durant la réaction.

Détection fluorescent — principe ?

Fluorochrome émet une fluorescence proportionnelle à l’ADN amplifié.

Courbe de fluorescence — rôle ?

Permet de déterminer le Ct et d’estimer la quantité d’ADN initiale.

ADN polymérase — source ?

Thermus aquaticus (Taq polymérase).

Hybridation des amorces — étape ?

Fixation spécifique aux séquences cibles d’ADN.

Amplification exponentielle — caractéristique ?

Le nombre de copies double à chaque cycle.

Cycle seuil (Ct) — définition ?

Cycle où la fluorescence dépasse le bruit de fond.

Phase exponentielle — quand ?

Lorsque la fluorescence augmente de façon régulière et rapide.

Taq polymérase — avantage ?

Thermostable, résiste à la chaleur, facilite la cycle thermique.

Courbe d’étalonnage — utilité ?

Estimer la quantité initiale d’ADN par comparaison.