Organisation des TP biochimie ?
Séances au bâtiment Henri Moissan, début à 9h, présence obligatoire.
Absence non justifiée — conséquence ?
Interdiction de passer l’épreuve écrite.
Contrôle continu — composition ?
1/3 TP et compte rendu, 2/3 examen écrit.
Rôle des enseignants ?
Encadrent, corrigent, évaluent et valident les travaux.
Extraction protéines Arabidopsis — étape clé ?
Broyage, filtration, centrifugation dans tampon stabilisant.
Tampon phosphate pH 7,5 — rôle ?
Stabiliser les protéines lors de l’extraction.
Cocktail d’inhibiteurs — but ?
Prévenir la dégradation protéique.
PVPP — utilisation ?
Éliminer polyphénols interférents.
Filtration et centrifugation — objectif ?
Clarifier l’extrait, éliminer débris et PVPP.
Chromatographie échangeuse — principe ?
Séparation par charge négative, échange d’ions Na+.
Chargement sur la résine — étape ?
Déposer l’extrait pour retenir protéines chargées négativement.
Élution par NaCl — principe ?
Dissociation des protéines de la résine par force ionique croissante.
Absorbance à 280 nm — utilité ?
Tracer le profil d’élution des protéines.
Spectrophotométrie ICDH — principe ?
Suivi formation NADPH à 340 nm.
Réaction ICDH — produit ?
NADPH à partir de NADP+ et isocitrate.
Méthode Bradford — principe ?
Liaison du bleu de Coomassie aux protéines, changement de couleur.
Changement de couleur Bradford ?
Rouge à bleu, mesurable à 595 nm.
SDS-PAGE — principe ?
Séparation protéines selon masse moléculaire sous dénaturation.
Dénaturation SDS — rôle ?
Uniformiser charge, détruire structure native.
Electrophorèse native — principe ?
Séparer selon charge, conformation, masse sans dénaturant.
Isoformes en native — avantage ?
Identifier différentes formes ou conformations.
Cinétique ICDH — paramètre ?
Vitesse initiale (v₀), liée à formation NADPH.
Michaelis-Menten — relation ?
v₀ = Vmax×[S]/(Km + [S]) pour paramètres cinétiques.
Activité spécifique — définition ?
Activité enzymatique par mg de protéines.
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1. Quelle est la signification de la spectrophotométrie à 340 nm dans le contrôle biochimique de l'activité enzymatique ICDH?
2. Quelle est la dilution des cocktails d’inhibiteurs de protéases utilisée lors de l’extraction des protéines d’Arabidopsis ?
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